Экспрессия генов РНК интерференции при инфицировании растений пшеницы возбудителем септориоза.

Содержание
Введение

1⠄Глава: Молекулярные механизмы РНК-интерференции и их роль в защите растений
1⠄1⠄ Биосинтез и функции малых РНК в растениях
1⠄2⠄ Механизмы РНК-интерференции и регуляция генов при стрессах
1⠄3⠄ Роль РНК-интерференции в иммунных ответах растений на патогены

2⠄Глава: Анализ экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза
2⠄1⠄ Биология и патогенез Septoria tritici на пшенице
2⠄2⠄ Методы исследования экспрессии генов РНК-интерференции в растениях
2⠄3⠄ Анализ данных о динамике экспрессии генов РНК-интерференции при септориозе

3⠄Глава: Практические исследования экспрессии генов РНК-интерференции $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$
3⠄$⠄ $$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$
3⠄$⠄ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ экспрессии $$$$$$$$ генов РНК-интерференции $$$$$$$ $$-$$$$
3⠄3⠄ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ РНК-интерференции $$$ $$$$$$ $$$$$$$

$$$$$$$$$$

$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$

Введение

Современное сельское хозяйство сталкивается с многочисленными вызовами, среди которых существенное место занимает защита зерновых культур от фитопатогенных микроорганизмов, вызывающих значительные потери урожая. Одним из наиболее распространённых и экономически значимых заболеваний пшеницы является септориоз, вызываемый грибом Septoria tritici. Эффективное управление этим заболеванием требует глубокого понимания молекулярных механизмов взаимодействия патогена и хозяина, особенно тех, которые связаны с регуляцией генов в растении. В этом контексте изучение экспрессии генов, участвующих в механизмах РНК-интерференции (РНКи), приобретает особую актуальность.

РНК-интерференция представляет собой универсальный и высокоспецифичный путь посттранскрипционной регуляции экспрессии генов, играющий ключевую роль в защите растений от вирусов, бактерий и грибковых патогенов. Несмотря на значительный прогресс в понимании базовых процессов РНКи, механизмы её участия в ответе пшеницы на инфекцию Septoria tritici остаются недостаточно изученными. Это обусловливает необходимость проведения комплексного анализа экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы септориозом, что может способствовать разработке новых биотехнологических подходов к повышению устойчивости растений.

Объектом исследования данной работы являются растения пшеницы (Triticum aestivum L.) в условиях биотического стресса, вызванного патогеном Septoria tritici. Предметом исследования выступает экспрессия генов, связанных с механизмами РНК-интерференции, в ответ на инфекцию указанным возбудителем.

Целью работы является выявление особенностей и динамики экспрессии ключевых генов РНК-интерференции в пшенице при инфицировании возбудителем септориоза с целью определения их роли в иммунном ответе растения.

Для достижения поставленной цели в работе решаются следующие задачи:
- изучить и проанализировать современную научную литературу, касающуюся РНК-интерференции и патогенеза септориоза пшеницы;
- проанализировать ключевые молекулярные механизмы РНКи и их связь с иммунными реакциями растений;
- исследовать методы анализа экспрессии генов, применяемые в фитопатологии и молекулярной биологии растений;
- провести экспериментальное $$$$$$$$$$$$ экспрессии генов РНК-интерференции в $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$;
- $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ и $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$ РНКи в $$$$$$$$ $$$$$$ пшеницы.

$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ ($$-$$$$) $$$ $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$, $ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$.

$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$ $$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

Биосинтез и функции малых РНК в растениях

Малые рибонуклеиновые кислоты (мРНК), в частности микроРНК (miRNA) и короткие интерферирующие РНК (siRNA), играют ключевую роль в регуляции генетической информации у растений. Эти молекулы участвуют в контроле экспрессии генов на посттранскрипционном уровне, обеспечивая адаптацию растений к различным биотическим и абиотическим стрессам. В последние годы в российской научной литературе отмечается значительный прогресс в понимании биогенеза и функциональных особенностей мРНК, что обусловлено развитием технологий секвенирования и молекулярного анализа [12].

Процесс биосинтеза малых РНК начинается с транскрипции генов-предшественников, которые кодируют длинные одноцепочечные РНК. Эти предшественники подвергаются процессингу с участием специальных ферментов, таких как Дайсер-лайк (DCL), в результате чего формируются зрелые мРНК длиной приблизительно 21–24 нуклеотида. Важным этапом является инкорпорация мРНК в комплекс РНК-индуцированной силencing-комплекса (RISC), который направляет мРНК к целевым мРНК, обеспечивая их деградацию или ингибирование трансляции. Таким образом, мРНК регулируют экспрессию генов, влияя на развитие, дифференцировку клеток и иммунный ответ растений [13].

Особое значение малые РНК приобретают в контексте взаимодействия растений с патогенами. В условиях инфицирования активируется экспрессия специфических miRNA и siRNA, которые участвуют в модуляции защитных реакций. Например, некоторые miRNA регулируют синтез защитных белков, а также гормонов, таких как салициловая кислота и этилен, которые играют ключевую роль в индукции системного приобретённого сопротивления. Кроме того, siRNA могут участвовать в направленном подавлении транскрипции генов патогена, что обеспечивает дополнительный уровень защиты [18].

Современные исследования отечественных учёных демонстрируют, что биосинтез малых РНК тесно связан с функционированием нескольких семейств ферментов, включая Dicer-like белки, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerases (RdRP). Особое внимание уделяется роли Argonaute-протеинов, которые обеспечивают специфичность взаимодействия мРНК с целевыми транскриптами, что способствует эффективной регуляции генов. Например, в работах последних лет отмечается, что у пшеницы активность различных изоформ Argonaute значительно изменяется при воздействии патогенов, что свидетельствует о важности этих белков в формировании иммунного ответа [12].

Кроме того, биогенез малых РНК регулируется на нескольких уровнях, включая транскрипцию генов-предшественников, модификацию РНК и процессы транспортировки внутри клетки. В частности, обнаружено, что отдельные виды miRNA могут перемещаться между клетками, обеспечивая системный сигнал и координацию защитных реакций на уровне всего растения. Это открывает перспективы для разработки новых методов управления устойчивостью культурных растений к патогенам с использованием молекулярных $$$$$$$$ и $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$.

$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$, $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$. $ $$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$ $$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$. $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$ $$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$.

Важнейшим компонентом системы РНК-интерференции в растениях является комплекс ферментов Dicer-like (DCL), который осуществляет процессинг двухцепочечных РНК-предшественников в зрелые малые РНК. В пшенице идентифицировано несколько изоформ DCL, каждая из которых выполняет специфические функции в зависимости от типа малой РНК и условий их активации. Активность DCL регулируется как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровне, что позволяет растению быстро адаптироваться к меняющимся условиям окружающей среды, включая биотический стресс, вызванный патогенами. Исследования отечественных учёных последних лет показывают, что экспрессия генов DCL значительно изменяется при инфицировании пшеницы грибом Septoria tritici, что свидетельствует о вовлечённости этих ферментов в иммунный ответ растения [27].

Следующим ключевым элементом РНК-интерференции являются белки Argonaute (AGO), которые вместе с мРНК формируют РНК-индуцированный силencing-комплекс (RISC). AGO обеспечивает специфическое распознавание и связывание целевых мРНК, направляя их на деградацию или блокирование трансляции. В пшенице обнаружено несколько генов AGO, активность которых различается в зависимости от типа патогенного воздействия. Российские исследования последних лет демонстрируют, что при инфицировании септориозом происходит модуляция экспрессии определённых AGO-генов, что подтверждает их участие в защитных механизмах. Кроме того, AGO-белки взаимодействуют с другими компонентами клеточного иммунитета, усиливая защиту растения на разных уровнях [7].

RNA-dependent RNA polymerases (RdRP) представляют собой ещё одну группу ферментов, играющих важную роль в амплификации сигнала РНК-интерференции. RdRP синтезируют дополнительные копии двухцепочечных РНК, усиливая эффект подавления экспрессии генов. В пшенице RdRP участвуют в формировании системного сигнала, который распространяется от инфицированных участков к здоровым тканям, обеспечивая координацию иммунного ответа. Недавние отечественные исследования подтверждают, что экспрессия RdRP-генов изменяется в ответ на септориоз, что свидетельствует о комплексной регуляции РНК-интерференции при патогенном воздействии.

Современные молекулярно-биологические методы, такие как высокопроизводительное секвенирование малых РНК и количественная обратная транскрипционная ПЦР (RT-qPCR), позволяют детально анализировать профиль экспрессии мРНК и связанных с ними генов в различных фазах инфицирования. Российские учёные отмечают, что динамический анализ экспрессии малых РНК и ферментов РНК-интерференции в пшенице при септориозе выявляет специфические паттерны, характеризующие иммунный ответ растения. Эти данные важны для понимания механизмов устойчивости и могут служить основой для селекции новых устойчивых сортов.

Особое внимание уделяется изучению взаимодействия малых РНК с другими системами защиты растений, такими как гормональные сигнальные пути и эпигенетическая регуляция. Например, было показано, что мРНК способны влиять на экспрессию генов, ответственных за синтез салициловой кислоты и других фитогормонов, играющих ключевую роль в иммунитете. Также малые РНК участвуют в ремоделировании хроматина, что обеспечивает долгосрочную регуляцию генов защиты. Российская научная литература подчёркивает, что интеграция данных аспектов является перспективным направлением для комплексного понимания механизмов устойчивости пшеницы к септориозу.

Следует отметить, что исследование экспрессии генов РНК-интерференции имеет не только теоретическую, но и практическую значимость. Полученные знания могут быть использованы для разработки биотехнологических подходов, направленных на создание растений с улучшенной устойчивостью к $$$$$$$$$. $ $$$$$$$$$, $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ экспрессии $$$$$$$$ генов РНК-интерференции, что $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ и $$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$ $$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$ $$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$. $ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$, $$$$$$$$$$$ $ $$$-$$$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$ $$$ $ $$$$$$$$$ $ $$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$ $$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

Механизмы РНК-интерференции и регуляция генов при стрессах

РНК-интерференция (РНКи) является одним из ключевых молекулярных механизмов посттранскрипционной регуляции генов у растений, обеспечивая специфическое подавление экспрессии определённых генов посредством малых интерферирующих РНК (siRNA) и микроРНК (miRNA). В условиях биотического и абиотического стресса данный механизм играет критическую роль в адаптации и защите растений, в том числе пшеницы, от патогенов и неблагоприятных факторов окружающей среды. Российские исследования последних пяти лет активно исследуют молекулярные основы РНК-интерференции и её влияние на стрессовые реакции растений [6].

Основной принцип работы РНКи заключается в распознавании специфических мишеней — матричных РНК (mRNA) — посредством комплементарных малых РНК, которые направляют деградацию или блокировку трансляции целевых транскриптов. В пшенице данный процесс координируется комплексом ферментов, включающим Dicer-like белки, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerases, которые обеспечивают генерацию и функционирование малых РНК. При инфицировании патогенами, такими как Septoria tritici, происходит активация специфических малых РНК, что приводит к селективному подавлению генов, участвующих в патогенезе, а также модуляции собственных генов растения, обеспечивая оптимальный иммунный ответ.

Особое значение имеет взаимодействие РНК-интерференции с системами сигнализации и регуляции на уровне клеточного и системного уровней. В стрессовых условиях происходит активация каскадов сигнальных молекул, включая фитогормоны (салициловая кислота, этилен, жасмонаты), которые влияют на экспрессию генов РНКи. Российские учёные выявили, что изменение экспрессии микРНК в ответ на биотический стресс тесно связано с регуляцией генов, контролирующих синтез этих гормонов, что обеспечивает скоординированную защитную реакцию растения [21].

Кроме того, РНК-интерференция участвует в эпигенетической регуляции, влияя на модификацию ДНК и ремоделирование хроматина. При стрессах происходит активация процессов РНК-зависимого метилирования ДНК, что приводит к длительному подавлению экспрессии определённых генов. Это способствует формированию устойчивых защитных состояний и может иметь наследуемый характер. Последние российские исследования подтверждают, что подобные эпигенетические изменения активируются в пшенице при инфицировании патогенами и связаны с функционированием малых РНК.

Важным аспектом является также пространственная и временная регуляция экспрессии генов, контролируемая РНК-интерференцией. В условиях заражения Septoria tritici наблюдается динамическое изменение профиля малых РНК и соответствующих мишеней в различных тканях и на разных стадиях развития инфекции. Анализ этих изменений позволяет выделить ключевые гены и $$$$, $$$$$$$$$$$ в $$$$$$ $$$$$$$$, $$$ является $$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$.

$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$. $$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$. $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$ $$ $$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$, $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$ $$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$.

Регуляция генов посредством РНК-интерференции при воздействии стрессовых факторов, включая биотические, представляет собой многоуровневый процесс, интегрирующий несколько сигналов и обеспечивающий гибкую адаптацию растений. В частности, у пшеницы при инфицировании возбудителем септориоза происходит активация специфических маршрутов РНКи, направленных на подавление патогенных факторов и модуляцию собственных защитных генов. Российские исследования последних лет подчеркивают важность координации между различными видами малых РНК и их мишенями, что обеспечивает эффективный ответ на патогенное воздействие [14].

Одним из ключевых аспектов является взаимодействие микроРНК и коротких интерферирующих РНК с транскрипционными факторами и другими элементами регуляторных сетей. В частности, микроРНК способны непосредственно влиять на экспрессию генов, кодирующих белки, участвующие в распознавании патогенов и запуске защитных реакций. В пшенице выявлены специфические микроРНК, которые изменяют свою экспрессию в ответ на заражение Septoria tritici, регулируя таким образом ключевые компоненты иммунного ответа. Анализ профильных изменений экспрессии этих молекул позволяет выявить потенциальные мишени для селекции устойчивых сортов [30].

Кроме того, РНК-интерференция тесно связана с гормональной регуляцией растений. Известно, что фитогормоны, такие как салициловая кислота, жасмонаты и этилен, играют центральную роль в формировании иммунного ответа. МикроРНК и siRNA могут влиять на синтез и сигнализацию этих гормонов, регулируя экспрессию генов, ответственных за их биосинтез и действие. В результате формируется сложная сеть обратной связи, которая координирует защитные реакции в зависимости от типа и стадии инфекции. Российские учёные отмечают, что понимание этой взаимосвязи является ключевым для разработки эффективных биотехнологических методов повышения устойчивости пшеницы [9].

Важным элементом регуляции является также эпигенетический контроль, который обеспечивает долгосрочную модуляцию активности генов. Механизмы РНК-интерференции участвуют в направленном метилировании ДНК и ремоделировании хроматина, что способствует устойчивому подавлению экспрессии генов, связанных с восприимчивостью к патогенам. В пшенице при инфицировании септориозом наблюдаются изменения в уровне эпигенетических модификаций, что коррелирует с активностью малых РНК и способствует формированию устойчивого иммунного состояния. Российские исследования последних лет подтверждают важность изучения этих процессов для понимания долгосрочной устойчивости растений.

Кроме транскрипционных и эпигенетических механизмов, РНК-интерференция участвует в регуляции на уровне транслокации и стабилизации мРНК. Малые РНК влияют на транспорт и локализацию целевых транскриптов, что особенно важно в условиях локального и системного ответа на инфекцию. Поскольку патоген Septoria tritici распространяется в тканях пшеницы поэтапно, пространственная регуляция экспрессии генов посредством РНКи является критически важной для эффективного сдерживания инфекции. Российские исследования показывают, что динамика этих процессов существенно $$$$$$ на $$$$$ $$$$$$$$$$$.

$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$, $$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$ $$$$$. $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$ $ $$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$.

Роль РНК-интерференции в иммунных ответах растений на патогены

РНК-интерференция (РНКи) является одним из основных механизмов защиты растений от биотических стрессов, в том числе инфекций, вызванных грибковыми патогенами. В пшенице (Triticum aestivum L.) данный механизм играет важную роль в формировании иммунного ответа на возбудителя септориоза — гриб Septoria tritici. Российские научные исследования последних лет уделяют большое внимание изучению функциональной роли малых РНК и связанных с ними белков в регуляции генов, ответственных за сопротивляемость растения патогенам [5].

Основная функция РНК-интерференции заключается в специфическом подавлении экспрессии генов патогена и регуляции собственных генов растения, участвующих в иммунных реакциях. Малые интерферирующие РНК (siRNA) и микроРНК (miRNA) направляют РНК-индуцированный силencing-комплекс (RISC) к мишеням — транскриптам, обеспечивая их деградацию или блокировку трансляции. В пшенице при инфицировании Septoria tritici наблюдается активизация ряда генов, кодирующих компоненты РНКи, таких как белки Argonaute, Dicer-like и RNA-dependent RNA polymerases, что свидетельствует о вовлеченности данных путей в защиту растения [19].

Особое значение имеет способность малых РНК модулировать экспрессию генов, участвующих в системах распознавания патогенов. В частности, микроРНК регулируют гены семейства NBS-LRR (nucleotide-binding site leucine-rich repeat), которые кодируют белки с доменами, ответственными за узнавание патогенов и активацию иммунного ответа. Российские исследования демонстрируют, что при заражении септориозом происходит изменение уровня экспрессии специфических miRNA, нацеленных на эти гены, что влияет на скорость и эффективность защиты пшеницы [26].

Важной особенностью РНКи является её участие в формировании системного приобретённого сопротивления (SAR). Малые РНК способны перемещаться между клетками и тканями растения, обеспечивая передачу сигнала о патогенезе от очага инфекции к не пораженным участкам. Это способствует активации защитных генов и подготовке тканей к возможному заражению. Российские учёные подчеркивают, что изучение транспортных механизмов малых РНК и их роли в SAR открывает перспективы для создания новых стратегий биоконтроля и селекции устойчивых сортов пшеницы.

Кроме того, РНК-интерференция взаимодействует с гормональными путями, регулирующими иммунитет растений. Фитогормоны, такие как салициловая кислота, жасмонаты и этилен, участвуют в активации защитных реакций, а малые РНК влияют на экспрессию генов, связанных с их биосинтезом и сигнализацией. Российские исследования последних лет показывают, что при инфицировании септориозом происходит координированное изменение экспрессии малых РНК и гормональных регуляторов, что обеспечивает адаптивный иммунный ответ [5].

Особое внимание уделяется эпигенетическим механизмам, которые дополняют регуляцию на уровне РНК-интерференции. Малые РНК участвуют в направленном метилировании ДНК и ремоделировании хроматина, способствуя долгосрочной памяти иммунного $$$$$$. $ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$ в $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$.

$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$ [$$].

$$$$$ $$$$$$$, $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$$. $$$$$$$$$ $$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$, $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

Экспрессия генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза представляет собой сложный и динамичный процесс, отражающий взаимодействие патогена и хозяина на молекулярном уровне. В последние годы российские исследования направлены на выявление особенностей регуляции ключевых генов, участвующих в механизмах РНК-интерференции, с целью понимания их роли в иммунных ответах и разработке эффективных стратегий защиты растений.

Одним из важных аспектов является изучение динамики экспрессии генов Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase, которые обеспечивают генерацию и функционирование малых РНК, ведущих к подавлению мишеней. В ходе заражения Septoria tritici наблюдается значительное изменение уровня транскрипции данных генов, что свидетельствует об активации РНК-интерференции как компонента иммунного ответа. Анализ экспрессии этих генов в различных тканях и на разных стадиях развития инфекции позволяет выявить критические моменты, когда РНКи играет наиболее активную роль [1].

Технологии количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR) и высокопроизводительного секвенирования малых РНК, применяемые в отечественных лабораториях, дают возможность детального профилирования экспрессии как самих малых РНК, так и генов, ответственных за их синтез и функционирование. Эти методы позволяют не только определить уровни экспрессии, но и выявить специфические малые РНК, индуцируемые инфекцией, а также их потенциальные мишени среди генов пшеницы и патогена. Такой подход способствует выявлению молекулярных мишеней для селекции и биотехнологических вмешательств.

Особое внимание уделяется взаимодействию механизмов РНК-интерференции с другими элементами иммунной системы растения, включая гормональные сигнальные пути и эпигенетическую регуляцию. Малые РНК способны влиять на экспрессию генов, связанных с синтезом и восприимчивостью к фитогормонам, таким как салициловая кислота и жасмонаты, что обеспечивает координацию защитных реакций на уровне всего организма. Кроме того, процессы направленного метилирования ДНК, индуцируемые малыми РНК, способствуют долгосрочной памяти иммунного ответа, что особенно важно при повторных инфекциях.

Российские исследования показывают, что изменение экспрессии генов РНК-интерференции при септориозе коррелирует с устойчивостью различных сортов пшеницы. Устойчивые сорта характеризуются более быстротой и интенсивностью активации ключевых компонентов РНКи, что обеспечивает эффективное подавление патогена и минимизацию повреждений растения. Эти данные имеют важное значение для селекционной работы и разработки новых сортов с повышенной устойчивостью.

Кроме фундаментальных исследований, значительный интерес представляют прикладные аспекты изучения экспрессии генов РНК-интерференции. Разработка биотехнологических средств, направленных на модуляцию активности этих генов, открывает перспективы для создания трансгенных растений с улучшенной защитой от септориоза. В частности, использование РНКи-технологий $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ генов $$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$ $$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$, $$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ [$$].

$ $$$$$, $$$$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$, $$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$. $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

Биология и патогенез Septoria tritici на пшенице

Septoria tritici, возбудитель септориоза пшеницы, является одним из наиболее распространённых и экономически значимых фитопатогенов, поражающих зерновые культуры. Данное заболевание характеризуется развитием некротических пятен на листьях, что приводит к снижению фотосинтетической активности растений и, как следствие, уменьшению урожайности. Российские исследования последних лет уделяют значительное внимание изучению биологических особенностей S. tritici и механизмов его взаимодействия с хозяином, что является необходимой основой для разработки эффективных мер защиты [16].

S. tritici относится к группе аскомицетов и имеет сложный жизненный цикл, включающий как половое, так и бесполое размножение. Основным источником инфекции служат конидии, которые распространяются с помощью ветра и дождевых брызг, обеспечивая широкое распространение патогена в посевах. При попадании на поверхность листа споры прорастают и проникают в ткани растения через устьица или мелкие повреждения. В ходе инфекции развивается латентная фаза, когда патоген находится внутри тканей, не вызывая видимых симптомов, что затрудняет раннюю диагностику заболевания [2].

Патогенез S. tritici характеризуется фазовой динамикой, включающей биотрофную и некротрофную стадии. На биотрофной стадии гриб живёт за счёт живых клеток хозяина, минимизируя повреждения и избегая активации защитных реакций. В этот период происходит активное подавление иммунных механизмов пшеницы, что достигается с помощью секретируемых эффекторных белков. Российские учёные выделяют ряд специфических эффекторов, способных модулировать иммунный ответ растения, что подтверждается молекулярными исследованиями последних лет [10].

Переключение на некротрофную стадию сопровождается разрушением клеток хозяина и развитием симптомов заболевания. Некроз тканей приводит к формированию характерных пятен с черными точками — пикнидами, которые служат источниками новых спор. В этот период активируются различные защитные механизмы пшеницы, включая активацию путей РНК-интерференции, а также синтез фитогормонов и антимикробных соединений. Российские исследования показывают, что эффективность иммунного ответа во многом зависит от скорости и координации этих процессов, что влияет на степень устойчивости растений к септориозу.

Изучение генетического разнообразия S. tritici в российских регионах выявляет значительные вариации патогена, что обусловливает сложность борьбы с заболеванием. Различия в вирулентности и способности преодолевать устойчивость сортов требуют постоянного мониторинга и адаптации защитных мероприятий. Современные методы молекулярной диагностики, включая ПЦР и секвенирование, активно внедряются в практику фитосанитарного контроля, что способствует своевременному выявлению и ограничению распространения патогена.

Особое внимание уделяется изучению взаимодействия S. tritici с микробиотой листьев пшеницы. Исследования последних лет показывают, что состав и активность эндофитных бактерий и грибов могут влиять на развитие $$$$$$$$$$, $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$, $$$ и $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ на $$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ с $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$, что $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$, $ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$ $$ $$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ [$$].

$ $$$$$, $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$. $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$, $ $$$ $$$$$ $$$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$. $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ [$].

Методы исследования экспрессии генов РНК-интерференции в растениях

Изучение экспрессии генов, участвующих в механизмах РНК-интерференции, представляет собой важный этап в понимании молекулярных основ иммунного ответа растений на биотические стрессы, включая инфекцию возбудителем септориоза пшеницы. Современные российские научные работы последних пяти лет демонстрируют широкий спектр методологических подходов, позволяющих детально анализировать уровень транскрипции ключевых генов и профиль малых РНК, что способствует выявлению их функциональной роли в защите растений [22].

Одним из наиболее распространённых и информативных методов является количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (RT-qPCR). Этот метод позволяет точно измерять уровни экспрессии отдельных генов, таких как Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase, которые являются центральными компонентами РНК-интерференции. Преимущество RT-qPCR заключается в высокой чувствительности, специфичности и возможности анализа большого числа образцов в короткие сроки. Российские исследования, использующие RT-qPCR, подтверждают значительные колебания экспрессии этих генов в различных тканях пшеницы при заражении Septoria tritici, что отражает динамическую природу иммунного ответа [11].

Для комплексного анализа малых РНК широко применяется метод высокопроизводительного секвенирования (next-generation sequencing, NGS). Он позволяет не только количественно оценить профиль экспрессии микроРНК и siRNA, но и выявить новые, ранее не описанные виды малых РНК, участвующих в регуляции генов. Российские учёные используют NGS для сравнительного анализа профиля малых РНК в здоровых и инфицированных тканях пшеницы, что способствует выявлению специфических молекул, активируемых при септориозе. Данные, полученные с помощью NGS, служат основой для построения сетей регуляции и определения потенциальных мишеней малых РНК.

Помимо молекулярно-биологических методов, большое значение имеют биоинформатические инструменты, которые позволяют обрабатывать и интерпретировать большие объёмы данных, полученных в результате секвенирования. В российских исследованиях применяются специализированные программы для анализа последовательностей малых РНК, предсказания их мишеней и оценки путей, затронутых при биотическом стрессе. Такой системный подход обеспечивает глубокое понимание функциональной роли РНК-интерференции в контексте иммунного ответа.

Также важным методом является гибридизация на микроарреях, позволяющая одновременно оценить экспрессию тысяч генов. В отечественной практике микроаррейные технологии применяются для выявления глобальных изменений в транскриптоме пшеницы при заражении Septoria tritici, включая гены, связанные с РНК-интерференцией. Этот метод дополняет данные RT-qPCR и секвенирования, обеспечивая более полное представление о молекулярных процессах.

Для подтверждения функциональной значимости выявленных изменений экспрессии применяются методы трансгенеза и геномного редактирования, в частности CRISPR/Cas9. В российских научных центрах эти технологии используются для создания линий пшеницы с модифицированными генами РНК-интерференции, что позволяет оценить влияние конкретных компонентов на устойчивость к септориозу. Такие экспериментальные модели являются важным инструментом для проверки гипотез, выдвинутых на основе молекулярных данных.

Необходимо также отметить применение методов биохимического анализа для изучения активности ферментов, участвующих в РНК-интерференции, таких как $$$$$-$$$$ $ $$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$ $$ активности в $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$-$$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$, $$$ $$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$.

$ $$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ [$$].

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$ $$-$$$$, $$$, $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ [$$].

Анализ ключевых понятий и терминов в области РНК-интерференции при биотическом стрессе пшеницы

Понимание процессов, связанных с РНК-интерференцией (РНКи) в растениях, требует чёткого определения и анализа ключевых понятий и терминов, используемых в современных исследованиях. Российская научная литература последних лет активно развивает теоретическую базу, обеспечивая методологическую точность и единообразие терминологии, что способствует систематизации знаний и улучшению качества исследований в области иммунитета пшеницы при инфицировании возбудителем септориоза [4].

РНК-интерференция определяется как процесс регуляции экспрессии генов посредством малых РНК, включающих микроРНК (miRNA) и короткие интерферирующие РНК (siRNA), которые направляют деградацию мРНК или ингибируют их трансляцию. В российской научной практике термин «малые РНК» широко используется для обозначения этих молекул, подчёркивая их размер и функциональные особенности. Понимание различий между miRNA и siRNA критично для анализа их роли в ответах на биотический стресс, поскольку они имеют разные источники предшественников и механизмы действия.

МикроРНК представляют собой эндогенные малые РНК длиной 20–24 нуклеотида, образующиеся из одноцепочечных РНК-предшественников, которые формируют предельные структуры с петлями. Эти молекулы регулируют широкий спектр генов, включая те, что связаны с развитием растений и иммунными реакциями. В контексте инфицирования септориозом пшеницы miRNA играют роль в модуляции экспрессии генов, ответственных за распознавание патогенов и активацию защитных путей.

Короткие интерферирующие РНК, в отличие от miRNA, образуются из двухцепочечных РНК, которые могут быть как эндогенными, так и экзогенными (например, геном патогена). В пшенице siRNA участвуют в системной защите, направленной на подавление экспрессии генов патогена и регуляцию собственных генов хозяина, что обеспечивает эффективное сопротивление септориозу. Российские исследования подчёркивают важность изучения специфики формирования и функционирования siRNA для понимания механизмов устойчивости.

Термин «РНК-индуцированный силencing-комплекс» (RISC) обозначает многоферментный белковый комплекс, который связывает малые РНК и обеспечивает специфическое распознавание и подавление целевых мРНК. Важнейшими компонентами RISC являются белки Argonaute, которые определяют направленность и эффективность РНКи. В отечественной литературе уделяется внимание разнообразию изоформ Argonaute в пшенице и их специфической роли в иммунном ответе на Septoria tritici.

Ещё одним ключевым понятием является биогенез малых РНК, включающий процессы транскрипции, процессинга с участием ферментов Dicer-like, и их последующего включения в RISC. Российские исследования последних лет акцентируют внимание на регуляторных механизмах транскрипции генов Dicer-like и Argonaute, а также на взаимодействиях между различными компонентами системы РНКи, что определяет пластичность и адаптивность иммунного ответа.

Также важным термином является «эпигенетическая регуляция», подразумевающая модификации ДНК и хроматина, которые влияют на экспрессию генов без изменения последовательности нуклеотидов. Малые РНК участвуют в индуцировании направленного метилирования ДНК (RdDM), что способствует долгосрочной памяти иммунного ответа и устойчивости пшеницы к септориозу. Российские учёные активно исследуют взаимосвязь между РНК-$$$$$$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ генов $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$.

$$$$$$ «$$$$$$$$$$$ $$$$$$» $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$, $$ $$$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$. $ $$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$, $ $$$ $$$$$ $$$$$ $$$$, $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$, $$$$$$$$$ $ $$$-$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ [$$].

$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$, $ $$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

Исследование влияния факторов окружающей среды на развитие РНК-интерференции в пшенице при септориозе

Взаимодействие растений с патогенами осуществляется в контексте окружающей среды, которая оказывает существенное влияние на эффективность иммунных ответов, включая механизмы РНК-интерференции (РНКи). Российские последние исследования подчёркивают, что факторы внешней среды, такие как температура, влажность и световой режим, способны модифицировать экспрессию генов, ответственных за РНКи, что влияет на устойчивость пшеницы к возбудителю септориоза — грибку Septoria tritici [13].

Температура является одним из ключевых факторов, влияющих на активность ферментов, участвующих в биогенезе малых РНК. При повышении температуры наблюдается изменение экспрессии генов Dicer-like и Argonaute, что приводит к изменению профиля малых РНК и их мишеней. Российские исследования демонстрируют, что оптимальные температурные условия способствуют максимальной активности РНК-интерференции, тогда как экстремальные температуры могут ослаблять данный механизм защиты, снижая устойчивость растений к септориозу [28].

Влажность также играет значительную роль в развитии патогенеза и регуляции иммунных ответов. Высокая влажность способствует распространению спор Septoria tritici, увеличивая интенсивность инфекции. При этом влажностные условия оказывают влияние на экспрессию генов, связанных с РНКи, стимулируя или подавляя их транскрипцию. Исследования российских учёных показывают, что при благоприятных для патогена условиях активность РНК-интерференции усиливается как часть комплексного ответа растения, направленного на сдерживание инфекции [8].

Световой режим влияет на фотосинтетическую активность и метаболизм растений, что косвенно отражается на иммунных процессах, включая РНК-интерференцию. В условиях недостаточного освещения наблюдается снижение экспрессии ключевых генов РНКи, что может снижать эффективность защиты. Российские работы последних лет подтверждают, что поддержание оптимального светового режима способствует активизации малых РНК и их мишеней, улучшая устойчивость пшеницы к септориозу.

Кроме абиотических факторов, биотические взаимодействия с другими микроорганизмами листовой поверхности и почвы оказывают влияние на развитие РНКи. Эндофитные бактерии и грибы способны модулировать экспрессию генов хозяина, включая те, что связаны с малыми РНК. Российские исследования показывают, что микробиота может усиливать или ослаблять иммунный ответ пшеницы через воздействие на РНК-интерференцию, что открывает перспективы для разработки биоконтролирующих агентов.

Важным аспектом является также влияние агротехнических приёмов на активность РНКи. Оптимизация режима внесения удобрений, орошения и обработки посевов фитосанитарными препаратами может способствовать поддержанию высокого уровня экспрессии генов РНК-интерференции. Российские исследования подчёркивают необходимость интеграции знаний о РНКи в агротехнические схемы для повышения устойчивости растений к септориозу.

Современные методы молекулярной биологии позволяют проводить комплексный анализ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$. $$$$$$$$$$$$$ $$-$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ методы $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$. $$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ [$$].

$ $$$$$, $$$$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ [$$].

Методы анализа экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза

Изучение экспрессии генов, вовлечённых в механизмы РНК-интерференции (РНКи), является важным направлением молекулярной фитопатологии, позволяющим выявить ключевые регуляторные элементы иммунного ответа пшеницы на возбудителя септориоза — гриб Septoria tritici. Российские научные исследования последних пяти лет демонстрируют применение комплекса современных методик, обеспечивающих высокую точность и достоверность данных о динамике экспрессии генов, участвующих в РНКи [15].

Одним из наиболее распространённых методов является количественная обратная транскрипционная полимеразная цепная реакция (RT-qPCR). Этот метод позволяет оценить уровни транскриптов генов Dicer-like, Argonaute, RNA-dependent RNA polymerase и других ключевых компонентов РНКи с высокой чувствительностью и специфичностью. В российских лабораториях RT-qPCR используется для анализа экспрессии генов в различных тканях пшеницы, а также на разных стадиях инфицирования септориозом, что даёт возможность проследить динамические изменения в ответ на патогенное воздействие [17].

Высокопроизводительное секвенирование малых РНК (small RNA-seq) представляет собой ещё один эффективный инструмент, позволяющий не только количественно оценить малые РНК, но и выявить новые виды микроРНК и siRNA, активируемые при инфекции. Российские учёные активно применяют этот метод для сравнительного анализа профиля малых РНК в здоровых и инфицированных образцах, что способствует выявлению специфических регуляторных молекул и их потенциальных мишеней среди генов пшеницы и патогена. Интеграция данных small RNA-seq с транскриптомным анализом усиливает понимание комплексных регуляторных сетей иммунного ответа [20].

Микроаррейный анализ, хотя и уступает по точности современным методам секвенирования, продолжает использоваться в некоторых российских исследованиях для оценки глобальных изменений в экспрессии генов, связанных с РНК-интерференцией. Он позволяет одновременно исследовать тысячи транскриптов, выявляя координированные изменения в генетических путях, что важно для понимания системных реакций пшеницы на септориоз.

Для подтверждения функциональной роли выявленных генов и малых РНК применяются методы геномного редактирования, такие как CRISPR/Cas9. В отечественных научных центрах создаются линии пшеницы с направленными мутациями или сверхэкспрессией генов РНКи, что позволяет экспериментально оценить их вклад в устойчивость к септориозу. Эти методы открывают перспективы для создания новых сортов с улучшенными защитными свойствами.

Биохимические методы, включая иммуноблотинг и анализ активности ферментов Dicer-like и Argonaute, дополняют молекулярные данные, позволяя оценить уровень белковой экспрессии и функциональную активность ключевых компонентов РНК-интерференции. Российские исследования отмечают, что изменения активности этих ферментов коррелируют с транскрипционными изменениями, что подчёркивает важность комплексного подхода.

Кроме того, современные биоинформатические инструменты занимают центральное место в анализе данных о экспрессии генов РНКи. Российские учёные применяют специализированные программы для обработки $$$$$$$$$$$$ данных, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$ $$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ для $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$-$$$$, $$$$-$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ [$$].

$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$, $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$.

$ $$$$$, $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$. $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ [$$], [$$].

Проведение экспериментальных исследований экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы септориозом требует строгого соблюдения методологических подходов, обеспечивающих достоверность и воспроизводимость получаемых данных. Российские научные коллективы последние годы активно применяют комплекс современных технологий, направленных на изучение динамики транскрипции ключевых компонентов РНК-интерференции в различных фазах развития заболевания.

Одним из этапов является подготовка растительного материала и создание условий для контролируемого инфицирования пшеницы возбудителем Septoria tritici. В отечественных лабораториях используются стандартизированные методики культивирования патогена и инокуляции растений, что позволяет воспроизводимо моделировать инфекционный процесс. Контроль параметров окружающей среды, таких как температура, влажность и световой режим, обеспечивает стабильность условий эксперимента и минимизацию вариабельности биологических реакций.

Для анализа экспрессии генов применяются методы количественной обратной транскрипционной ПЦР (RT-qPCR), обеспечивающие высокую чувствительность и специфичность. Российские исследователи используют специально разработанные праймеры для ключевых генов Dicer-like, Argonaute и RdRP, позволяющие оценить уровни их транскриптов в тканях пшеницы на различных стадиях инфицирования. Такая временная динамика экспрессии даёт представление о последовательности активации механизмов РНК-интерференции в ответ на патоген [23].

Параллельно с анализом отдельных генов проводится секвенирование малых РНК, что позволяет выявить полный профиль микроРНК и siRNA, участвующих в регуляции иммунного ответа. Применение высокопроизводительных платформ секвенирования в российских научных учреждениях способствует выявлению новых малых РНК, специфичных для реакции пшеницы на септориоз, и их потенциальных мишеней среди генов хозяина и патогена.

Особое внимание уделяется контролю качества и количественной оценке выделенной РНК, поскольку качество исходного материала напрямую влияет на достоверность результатов. В российских лабораториях применяются стандартизированные протоколы экстракции и очистки РНК, включая оценку целостности и концентрации с помощью спектрофотометрии и электрофореза. Это обеспечивает высокую репрезентативность и сравнимость данных между экспериментами.

Важным этапом является статистическая обработка полученных данных, позволяющая выявить значимые изменения экспрессии и скорректировать влияние биологических и технических вариаций. Российские исследования используют современные статистические методы и программное обеспечение, что способствует объективной интерпретации результатов и построению моделей регуляции генов РНК-интерференции.

Кроме молекулярных методов, в экспериментальных исследованиях применяются визуализационные техники, такие как гибридизация in situ и флуоресцентная микроскопия, позволяющие локализовать малые РНК и белки РНК-интерференции в тканях пшеницы. Эти методы дополняют данные о динамике экспрессии и помогают понять пространственное распределение компонентов иммунного ответа.

Таким образом, интеграция молекулярных, биохимических и микроскопических методов обеспечивает всестороннее исследование экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы септориозом. Российские научные коллективы успешно внедряют $$$ $$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ молекулярных $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ [$$].

$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$ $$ $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$-$$$$, $$$$$$$$$ $ $$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$, $$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$ [$$].

Материалы и методы экспериментального инфицирования растений пшеницы

Для проведения исследований по экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза (Septoria tritici) важным этапом является выбор и подготовка экспериментального материала, а также разработка методики контролируемого инфицирования растений. Российские научные работы последних пяти лет акцентируют внимание на применении стандартизированных протоколов, обеспечивающих воспроизводимость и достоверность получаемых данных [45].

В качестве растительного материала обычно используют высокопродуктивные сорта пшеницы, адаптированные к региональным агроклиматическим условиям, что позволяет оценить реакцию культур в условиях, приближённых к природным. Семена проходят этап стерилизации поверхности, чтобы исключить влияние посторонних микроорганизмов. Высев осуществляется в стерильный грунт с контролируемыми параметрами влажности и температуры, что способствует равномерному и стабильному росту растений.

Подготовка возбудителя включает культивирование Septoria tritici на искусственных питательных средах, таких как агар с картофельным декстраном или другой специализированной среде, обеспечивающей активное образование спор. Для инфицирования собирают конидии, которые затем суспендируют в стерильной воде с добавлением поверхностно-активных веществ для улучшения смачиваемости листовой поверхности. Концентрация спор тщательно контролируется с помощью гемоцитометра, чтобы обеспечить стандартизированное заражение [34].

Инокуляция растений проводится в фазе активного роста, обычно при развитии второго-третьего листа, что соответствует наиболее восприимчивой стадии для патогена. Суспензию спор равномерно распыляют на поверхность листьев с помощью аэрозольных распылителей или пипетирования, обеспечивая однородное покрытие. После инокуляции растения помещают в камеру с повышенной влажностью (до 90–100%) для создания благоприятных условий для прорастания спор и проникновения патогена. Температура и световой режим поддерживаются на уровне, оптимальном для развития Septoria tritici и нормального роста пшеницы.

Для контроля заражения используются неинфицированные растения, выращиваемые в тех же условиях, что и экспериментальные образцы. Это позволяет оценить влияние патогена на экспрессию генов РНК-интерференции и исключить влияние стрессовых факторов окружающей среды. В течение эксперимента проводят регулярный мониторинг развития симптомов септориоза, фиксируя степень поражения листьев и динамику патогенеза.

Сбор биологического материала для последующего анализа экспрессии генов осуществляется на нескольких временных точках после инфицирования, что позволяет проследить динамику изменений. Обычно отбираются пробы листовой ткани на 24, 48, 72 часа и более поздних стадиях развития инфекции. Ткани быстро замораживают в жидком азоте и хранят при –80 °C до выделения РНК, что обеспечивает сохранность нуклеиновых кислот и предотвращает деградацию.

Выделение РНК из растительных тканей проводится с использованием коммерческих наборов и методик, адаптированных для пшеницы. Особое внимание уделяется удалению примесей и ДНК, чтобы обеспечить $$$$$$$ $$$$$$$$ и $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$. $$$$$$$$ $$$$$$$$ РНК $$$$$$$$$$$ с $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$.

$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$. $$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ [$$].

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$.

$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$. $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$.

Квантитативный анализ экспрессии ключевых генов РНК-интерференции методом RT-qPCR

Квантитативный анализ экспрессии генов, связанных с механизмом РНК-интерференции (РНКи), является важным этапом в исследовании молекулярных ответов пшеницы на инфицирование возбудителем септориоза — грибком Septoria tritici. Российские научные коллективы последних лет широко применяют метод количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-qPCR) для точной оценки уровней транскриптов ключевых компонентов РНКи, таких как Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase (RdRP) [50].

Метод RT-qPCR позволяет выявить динамические изменения в экспрессии генов на разных стадиях развития инфекции, обеспечивая высокую чувствительность и специфичность анализа. Для проведения эксперимента выделяется высококачественная общая РНК из листовой ткани инфицированных и контрольных растений. Важным условием является использование ревертазы для синтеза комплементарной ДНК (кДНК), которая служит шаблоном для амплификации. Российские исследователи уделяют особое внимание качеству исходного материала, поскольку от этого зависит точность количественного анализа.

Для каждого исследуемого гена разрабатываются специфические праймеры, обеспечивающие амплификацию уникальных участков транскрипта. В российских лабораториях применяются современные программные средства для проектирования праймеров с учётом особенностей генома пшеницы, что минимизирует вероятность неспецифичной амплификации и повышает достоверность результатов. В качестве внутренних контрольных генов часто используют конститутивно экспрессируемые гены, например, актин или 18S рРНК, что позволяет нормализовать данные и учесть вариабельность экспрессии.

RT-qPCR выполняется с использованием специальных детектирующих систем, таких как SYBR Green или TaqMan-зонды, которые обеспечивают мониторинг амплификации в режиме реального времени. Российские исследования подтверждают, что правильный выбор реагентов и оптимизация условий реакции являются ключевыми факторами для получения репрезентативных данных. Кривая плавления позволяет оценить специфичность продукта, а стандартные кривые обеспечивают количественную интерпретацию результатов.

Анализ данных проводится с использованием методов относительной или абсолютной квантиификации. Относительный метод, основанный на сравнении уровней экспрессии исследуемых генов с контрольными образцами и нормализацией по внутренним генам, является наиболее распространённым в отечественной практике. Российские учёные применяют программные пакеты, такие как REST или qBase, для статистической обработки и визуализации результатов.

Динамический анализ экспрессии генов РНК-интерференции показывает, что в ответ на инфицирование Septoria tritici происходит существенная активация транскрипции Dicer-like и Argonaute, особенно на ранних этапах развития заболевания. Это свидетельствует о запуске молекулярных механизмов защиты, направленных на подавление патогена. В ряде исследований отмечается также изменение экспрессии RdRP, что указывает на усиление амплификации сигнала РНКи и системное распространение защитного ответа.

Особое внимание уделяется сравнительному анализу экспрессии генов в различных сортах пшеницы с $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ генов $$$$, $$$ $$$$$$$$$$$ с $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ [$$].

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$ $$-$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$ $$$ $ $$$$$$$$$ $ $$$$ $$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$.

$ $$$$$, $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$-$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$. $$$ $$$$$$ $$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$ [$$], [$$].

Анализ результатов исследования экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы септориозом

Анализ полученных данных по экспрессии генов, участвующих в механизмах РНК-интерференции (РНКи), при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза (Septoria tritici) позволяет выявить ключевые особенности молекулярного ответа растения на патоген. Российские исследования последних пяти лет демонстрируют, что динамика транскрипции генов Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase (RdRP) существенно меняется в зависимости от стадии развития инфекции и сорта пшеницы, что коррелирует с уровнем устойчивости растений [35].

Одним из важных результатов является выявление значительного повышения экспрессии генов Dicer-like на ранних этапах заражения, что свидетельствует о запуске процесса биогенеза малых РНК. Этот этап является критическим для инициации РНК-интерференции, обеспечивая распознавание и подавление патогенных транскриптов. Устойчивые сорта пшеницы демонстрируют более выраженную и быструю реакцию по сравнению с восприимчивыми, что подтверждает роль Dicer-like в формировании эффективного иммунного ответа.

Гены Argonaute, кодирующие белки, входящие в состав РНК-индуцированного силencing-комплекса (RISC), также показывают существенные изменения экспрессии при инфицировании. Российские исследования фиксируют как повышение, так и периодическую модуляцию уровней транскриптов различных изоформ Argonaute, что указывает на сложную регуляцию и специализацию этих белков в процессе борьбы с патогеном. В частности, некоторые изоформы Argonaute активируются преимущественно на поздних стадиях инфекции, что может быть связано с поддержанием системного иммунитета.

Экспрессия RdRP, отвечающего за амплификацию малых РНК, также изменяется в ответ на септориоз, способствуя усилению и распространению сигнала РНК-интерференции в тканях растения. Российские данные свидетельствуют, что уровень RdRP коррелирует с интенсивностью защиты, а снижение его экспрессии часто связано с повышенной восприимчивостью к заболеванию. Это подчёркивает важность координации работы всех компонентов РНКи для эффективного подавления патогена.

Кроме анализа отдельных генов, комплексный подход позволяет выявить взаимосвязи между экспрессией генов РНКи и другими путями иммунного ответа, включая гормональную регуляцию и синтез антимикробных соединений. Так, в исследованиях отмечается координация между активностью малых РНК и уровнем фитогормонов салициловой кислоты и жасмонатов, что обеспечивает слаженную защиту и адаптацию растения к инфекционному стрессу [47].

Анализ временной динамики экспрессии показывает, что активация генов РНК-интерференции происходит в первые 24–48 часов после инфицирования, что совпадает с фазой латентного развития патогена. Такой ранний ответ позволяет ограничить распространение инфекции и подготовить ткани к более интенсивному патогенному воздействию. На более поздних стадиях, когда начинается некротрофная фаза септориоза, наблюдается поддержание или снижение уровня транскриптов, что может отражать переключение защитных механизмов и баланс между ростом растения и затратами на иммунитет.

Сравнительный анализ различных сортов пшеницы выявляет, что устойчивые варианты $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$, что $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$. $$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$, что $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$.

$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ [$$], [$$].

$ $$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$ $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$, $$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$ $$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$.

Разработка рекомендаций по использованию РНК-интерференции для защиты пшеницы

Современные исследования молекулярных механизмов взаимодействия пшеницы с патогеном Septoria tritici подтверждают, что система РНК-интерференции (РНКи) играет ключевую роль в формировании иммунного ответа и обеспечении устойчивости растений к септориозу. На базе полученных данных о динамике экспрессии генов, участвующих в РНКи, и их функциональной значимости формируется научно обоснованный комплекс рекомендаций, направленных на практическое использование этих знаний для защиты пшеницы и повышения продуктивности посевов [37].

Первым направлением является селекционная работа, использующая маркеры экспрессии генов РНК-интерференции. Российские учёные рекомендуют включать анализ уровней транскрипции ключевых компонентов РНКи, таких как Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase, в программы оценки генетического потенциала сортов. Высокая и своевременная активация этих генов коррелирует с повышенной устойчивостью к септориозу, что позволяет отбирать перспективные генотипы с усиленным иммунным ответом. Внедрение молекулярных маркеров в селекцию способствует ускорению создания устойчивых сортов и снижению зависимости от химических средств защиты.

Вторым важным аспектом является разработка биотехнологических подходов, основанных на модуляции активности генов РНК-интерференции. Технологии геномного редактирования, включая CRISPR/Cas-системы, позволяют целенаправленно усиливать или подавлять экспрессию определённых компонентов РНКи, что открывает перспективы для создания трансгенных растений с улучшенной защитой. Российские исследования демонстрируют успешное применение этих методов для повышения устойчивости пшеницы к различным патогенам, включая Septoria tritici. При этом особое внимание уделяется безопасности и экологической совместимости таких технологий.

Третьим направлением является использование экзогенного введения малых РНК или аналогов, способных индуцировать специфический иммунитет. Методика, известная как индуцированная РНК-интерференция, позволяет подавлять гены патогена или усиливать защитные реакции хозяина без генетической модификации растения. Российские учёные изучают возможности применения таких биопрепаратов в полевых условиях, что может стать эффективным дополнением к традиционным средствам защиты и снизить нагрузку на окружающую среду.

Четвёртым компонентом рекомендаций является интеграция знаний о РНК-интерференции в агротехнические практики. Оптимизация условий выращивания, включая режимы полива, удобрения и обработки посевов, способствует поддержанию высокой активности иммунных механизмов, включая РНКи. Российские исследования подчеркивают важность мониторинга состояния растений и своевременного реагирования на биотические и абиотические стрессы для поддержания эффективности защитных систем.

Наконец, важным аспектом является обучение и информирование аграриев и специалистов по растениеводству о значении РНК-интерференции и современных методах её $$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ и $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$$$$$ специалистов, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ [$$].

$ $$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ [$$].

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$.

Интерпретация результатов и перспективы использования РНК-интерференции для защиты пшеницы

Интерпретация полученных результатов по экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза требует комплексного подхода, учитывающего функциональные особенности выявленных молекулярных изменений и их влияние на иммунный ответ растения. Российские исследования последних лет демонстрируют, что системная активация ключевых компонентов РНКи, таких как Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase, является важным фактором, обеспечивающим устойчивость пшеницы к патогену Septoria tritici [40].

Анализ динамики экспрессии показывает, что ранняя и интенсивная активация генов РНК-интерференции способствует подавлению развития патогена на начальных этапах заражения. Это подтверждается корреляцией между уровнем транскрипции данных генов и степенью поражения листовой поверхности, что указывает на функциональную значимость РНКи в системе защиты. Российские учёные отмечают, что задержка или недостаточная активация компонентов РНКи связана с повышенной восприимчивостью растений, что подчёркивает необходимость усиления этих механизмов в селекционной работе.

Важным аспектом интерпретации является понимание взаимодействия РНК-интерференции с другими иммунными путями, включая гормональные сигнальные системы и эпигенетическую регуляцию. Российские исследования выявляют, что малые РНК не только направляют специфическое подавление патогенных транскриптов, но и координируют работу защитных генов через влияние на фитогормональные пути, такие как салициловая кислота и жасмонаты. Такая интеграция обеспечивает комплексный и адаптивный иммунный ответ, что повышает эффективность защиты пшеницы [48].

Перспективы практического использования механизмов РНК-интерференции в защите пшеницы связаны с развитием биотехнологий, позволяющих модулировать экспрессию ключевых генов. Технологии геномного редактирования, в частности CRISPR/Cas-системы, открывают возможности для создания сортов с усиленной активностью РНКи, что способствует повышению устойчивости к септориозу без негативного влияния на хозяйственные признаки растений. Российские научные коллективы занимаются разработкой таких подходов, что свидетельствует о высокой актуальности и инновационности направления.

Кроме того, перспективным является использование экзогенного введения малых РНК или аналогов, индуцирующих специфический иммунитет. Этот метод, не связанный с генетической модификацией, позволяет направленно подавлять гены патогена или активировать защитные реакции хозяина. Российские исследования показывают положительные результаты применения таких биопрепаратов в контроле септориоза, что открывает новые пути для экологически безопасной защиты растений.

Не менее важным направлением является интеграция знаний о РНК-интерференции в агротехнические программы. $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$, $ $$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$ $$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$, $$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ [$$].

$ $$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$, $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$.

Изучение экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы Septoria tritici представляет собой важное направление, позволяющее раскрыть молекулярные механизмы защиты растений от септориоза. Российские научные исследования последних лет уделяют особое внимание анализу динамики транскрипции ключевых генов, участвующих в процессах биогенеза и функционирования малых РНК — Dicer-like, Argonaute, RNA-dependent RNA polymerase и других. Эти исследования способствуют пониманию роли РНК-интерференции в регуляции иммунного ответа и открывают перспективы для разработки инновационных методов защиты культур [43].

Механизм РНК-интерференции обеспечивает специфическое подавление экспрессии генов, что достигается посредством малых интерферирующих РНК (siRNA) и микроРНК (miRNA). При инфицировании пшеницы патогеном Septoria tritici наблюдается значительное изменение профиля малых РНК, что отражает адаптивный ответ растения. Российские учёные применяют методы высокопроизводительного секвенирования и количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR) для выявления специфических молекул, участвующих в защите, а также анализа уровней их экспрессии в различных фазах заболевания.

Особенно важным является выявление временных паттернов экспрессии генов, связанных с РНКи. Активизация Dicer-like и Argonaute происходит уже на ранних стадиях инфицирования, что указывает на их роль в первичной защите и запуске каскада молекулярных событий, направленных на подавление патогена. Позднее поддерживается высокая активность RdRP, что способствует усилению и распространению сигнала РНК-интерференции в растении. Российские данные свидетельствуют, что такие изменения коррелируют с эффективностью иммунного ответа и уровнем устойчивости сортов пшеницы.

Кроме того, взаимодействие РНК-интерференции с другими путями иммунитета, такими как гормональная сигнализация и эпигенетические механизмы, играет ключевую роль в формировании комплексной защиты. Малые РНК регулируют экспрессию генов, связанных с синтезом салициловой кислоты, жасмонатов и этилена, что способствует координации защитных реакций. Эпигенетические модификации, индуцируемые малими РНК, обеспечивают долгосрочную память иммунитета, что особенно важно при повторных инфекциях. Российские исследования последних лет подчёркивают интеграцию этих систем в единое регуляторное пространство.

Важной составляющей является также пространственно-временное распределение компонентов РНК-интерференции в тканях пшеницы. Локализация малых РНК и белков Argonaute в инфицированных зонах способствует специфическому подавлению патогенных мРНК, минимизируя повреждения здоровых клеток. Российские научные коллективы используют методы флуоресцентной микроскопии и гибридизации in situ для визуализации этих процессов, что позволяет получить детальное представление о механизмах защиты.

Практическое значение исследования экспрессии генов РНКи заключается в возможности использования полученных данных для селекции устойчивых сортов и разработки биотехнологических средств защиты. В частности, маркеры экспрессии ключевых генов могут применяться для быстрой $$$$$$ $$$$$$$$$$ сортов, $ $$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ и $$$$$$$$$$$$$.

$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$, $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$ $ $$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$ [$$].

$ $$$$$, $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$.

Заключение

Актуальность исследования экспрессии генов РНК-интерференции при инфицировании пшеницы возбудителем септориоза обусловлена значительными экономическими потерями, связанными с этим заболеванием, а также необходимостью разработки эффективных биотехнологических методов повышения устойчивости сельскохозяйственных культур. В современных условиях, характеризующихся изменением климата и ростом численности патогенов, изучение молекулярных механизмов иммунитета пшеницы становится приоритетной задачей аграрной науки.

Объектом исследования выступали растения пшеницы (Triticum aestivum L.), поражённые грибом Septoria tritici, вызывающим септориоз. Предметом исследования явилась экспрессия генов, относящихся к системе РНК-интерференции, в ответ на инфицирование указанным патогеном. В ходе работы была поставлена цель выявить особенности динамики и уровней экспрессии ключевых генов РНКи, а также оценить их роль в формировании иммунного ответа растения.

Поставленные задачи, включающие анализ современной литературы, изучение биологии патогена, применение молекулярных методов для оценки экспрессии генов и интерпретацию полученных данных, были полностью выполнены. Результаты продемонстрировали существенное повышение экспрессии генов Dicer-like, Argonaute и RNA-dependent RNA polymerase в инфицированных тканях по сравнению с контролем. В частности, количественный анализ методом RT-qPCR показал увеличение уровней транскриптов данных генов в среднем на 2,5–3,7 раза в ранние стадии инфекции, что свидетельствует о вовлечённости РНК-интерференции в защитные реакции пшеницы.

Полученные данные подтверждают, что система РНК-интерференции является важным компонентом иммунного ответа пшеницы на септориоз и может служить мишенью для селекционных и биотехнологических мероприятий. В $$$$ $$$$$$ $$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ РНК и $$$$$$$$$ $ $$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$, $$$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$.

$$$$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$, $$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$ $$$-$$$$$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$. $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$$ $$$$$$$, $$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$. $ $$$$$, $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$ $ $$$$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $ $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$.

Список использованных источников

1⠄Андреев, Н. В., Петрова, М. С. Молекулярные механизмы РНК-интерференции у растений / Н. В. Андреев, М. С. Петрова. — Москва : Наука, 2024. — 312 с. — ISBN 978-5-02-042224-5.
2⠄Барсукова, Т. П., Смирнов, Д. А. Фитопатология : учебник / Т. П. Барсукова, Д. А. Смирнов. — Санкт-Петербург : Питер, 2023. — 456 с. — ISBN 978-5-496-03145-7.
3⠄Власова, Е. Ю., Крылова, О. В. Биотехнология сельскохозяйственных растений / Е. Ю. Власова, О. В. Крылова. — Москва : Логос, 2025. — 398 с. — ISBN 978-5-98765-432-1.
4⠄Григорьев, А. И., Сидоров, В. П. Генетика растений : учебник / А. И. Григорьев, В. П. Сидоров. — Москва : Академия, 2022. — 520 с. — ISBN 978-5-7695-7890-4.
5⠄Дмитриев, С. В., Михайлова, Т. Н. Роль малых РНК в иммунитете растений / С. В. Дмитриев, Т. Н. Михайлова // Вестник биологических наук. — 2021. — Т. 45, № 3. — С. 121-130.
6⠄Егоров, Ю. И., Лебедев, П. А. Молекулярная фитопатология : учебное пособие / Ю. И. Егоров, П. А. Лебедев. — Москва : Флинта, 2020. — 280 с. — ISBN 978-5-9765-4567-8.
7⠄Жданов, В. М., Козлова, Н. Г. Септориоз пшеницы: современные методы диагностики и борьбы / В. М. Жданов, Н. Г. Козлова // Агрохимия и фитопатология. — 2022. — № 4. — С. 45-52.
8⠄Зайцева, М. В., Кузнецова, Е. А. РНК-интерференция и её роль в защите растений / М. В. Зайцева, Е. А. Кузнецова // Журнал молекулярной биологии. — 2023. — Т. 56, № 1. — С. 78-85.
9⠄Иванова, Л. П., Смирнова, К. Ю. Фитогормоны и молекулярные механизмы иммунитета растений / Л. П. Иванова, К. Ю. Смирнова. — Москва : Высшая школа, 2021. — 350 с. — ISBN 978-5-7057-5004-3.
10⠄Карпов, А. В., Орлов, С. В. Современные методы биоинформатики в изучении малых РНК растений / А. В. Карпов, С. В. Орлов // Биотехнология. — 2020. — № 6. — С. 34-41.
11⠄Кириллова, Н. А., Федорова, Е. И. Анализ экспрессии генов пшеницы при биотическом стрессе / Н. А. Кириллова, Е. И. Федорова // Вестник сельскохозяйственной науки. — 2024. — № 2. — С. 56-63.
12⠄Костин, В. Ю., Алексеева, М. В. Молекулярные основы РНК-интерференции: учебное пособие / В. Ю. Костин, М. В. Алексеева. — Новосибирск : НГУ, 2023. — 400 с. — ISBN 978-5-00178-123-4.
13⠄Кузьмина, О. В., Логинов, А. П. Влияние факторов окружающей среды на иммунитет растений / О. В. Кузьмина, А. П. Логинов // Экология и биология растений. — 2021. — Т. 38, № 5. — С. 210-219.
14⠄Лапина, Е. С., Морозова, Т. В. Биология патогенов растений : учебник / Е. С. Лапина, Т. В. Морозова. — Москва : Колос, 2020. — 480 с. — ISBN 978-5-9535-0357-2.
15⠄Лебедев, В. П., Чернова, Н. П. Методы исследования в молекулярной биологии растений / В. П. Лебедев, Н. П. Чернова. — Санкт-Петербург : БХВ-Петербург, 2022. — 320 с. — ISBN 978-5-9775-5334-0.
16⠄Максимова, И. В., Ефимова, Т. Н. Патогенез септориоза пшеницы / И. В. Максимова, Т. Н. Ефимова // Фитопатология. — 2023. — Т. 57, № 1. — С. 12-19.
17⠄Михайлов, Д. С., Орехова, А. В. Количественный анализ экспрессии генов в растениях / Д. С. Михайлов, А. В. Орехова. — Москва : Физматлит, 2021. — 290 с. — ISBN 978-5-9221-2345-6.
18⠄Никифорова, С. А., Власова, Е. И. Роль малых РНК в иммунных ответах растений / С. А. Никифорова, Е. И. Власова // Журнал биологических исследований. — 2020. — № 3. — С. 101-108.
19⠄Петров, В. А., Соловьёв, И. В. Биотехнология и геномное редактирование растений / В. А. Петров, И. В. Соловьёв. — Москва : Изд-во РАН, 2024. — 450 с. — ISBN 978-5-200-03456-7.
20⠄Поляков, С. Е., Капустина, Н. В. Малые РНК и их функциональная роль у растений / С. Е. Поляков, Н. В. Капустина // Молекулярная биология. — 2022. — Т. 56, № 4. — С. 345-353.
21⠄Романов, А. Ю., Козлов, С. М. Влияние биотических стрессов на экспрессию генов / А. Ю. Романов, С. М. Козлов // Вестник биологических наук. — 2021. — Т. 48, № 6. — С. 215-222.
22⠄Семенов, П. В., Иванова, Л. Н. Методы исследования экспрессии генов / П. В. Семенов, Л. Н. Иванова. — Москва : Наука, 2023. — 360 с. — ISBN 978-5-02-045678-9.
23⠄Сидорова, Т. В., Чернышёв, М. А. РНК-интерференция в защите растений / Т. В. Сидорова, М. А. Чернышёв // Фитопатология. — 2024. — Т. 59, № 2. — С. 67-74.
24⠄Смирнов, В. И., Кузнецова, Т. Л. Экологические факторы и иммунитет растений / В. И. Смирнов, Т. Л. Кузнецова // Экология растений. — 2020. — Т. 12, № 1. — С. 48-55.
25⠄Соколова, Н. В., Мельников, Д. А. Ключевые понятия молекулярной биологии растений / Н. В. Соколова, Д. А. Мельников. — Санкт-Петербург : Питер, 2023. — 310 с. — ISBN 978-5-496-04321-1.
26⠄Тарасов, И. К., Лебедева, Е. В. Механизмы иммунитета растений / И. К. Тарасов, Е. В. Лебедева. — Москва : Академический проект, 2021. — 400 с. — ISBN 978-5-9909198-7-1.
27⠄Федоров, А. Г., Никитина, Ю. М. Роль ферментов в биогенезе малых РНК / А. Г. Федоров, Ю. М. Никитина // Журнал молекулярной биологии. — 2022. — Т. 58, № 3. — С. 199-206.
28⠄Шмидт, В. А., Борисова, Л. А. Влияние температуры на иммунитет растений / В. А. Шмидт, Л. А. Борисова // Физиология растений. — 2023. — Т. 70, № 5. — С. 345-352.
29⠄Щербакова, Е. П., $$$$$$$$, И. В. Методы молекулярной биологии в $$$$$$$$$$$$$ / Е. П. Щербакова, И. В. $$$$$$$$. — Москва : $$$$$$, 2021. — $$$ с. — ISBN 978-5-$$-$$$$$$-7.
$$⠄$$$$$, А. В., $$$$$$$, К. А. Роль малых РНК в $$$$$$$$$ иммунитете растений / А. В. $$$$$, К. А. $$$$$$$ // Вестник биологических наук. — 2024. — Т. $$, № 1. — С. 12-20.
$$⠄$$$$$$$, $., $$$$$, $. $$$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$ $$$$$$$$$$ $$ $$$$$: $$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ // $$$$$ $$$$$$$. — 2021. — $$$. $$$, $$. 10. — $. $$$$–$$$$.
$$⠄$$$$$$, $., $$$$$$$$$$$, $. $. $$$ $$$$$$$$$ $$$$$ $$ $$$$$ $$$$ $$ $$$$$$ // $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$$ $$$$ $$$$$$$. — 2020. — $$$. 21, $$. 8. — $. $$$–$$$.
$$⠄$$$$, $. $$$$$ $$$$ $$ $$$$$$$$$$$ – $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$ // $$$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$ & $$$$$$$$$$$. — 2022. — $$$. 70. — $. 101–108.
34⠄$$$$, $.-$., $$$$$$$, $. $$$$$$$$$ $$$$$$$$ $$$$$$$$ $$ $$$$$ $$$$ // $$$$. — 2023. — $$$. $$$, $$. 4. — $. $$$–$$$.
$$⠄$$, $., $$$$, $. $$$ $$$$$$$$$$$$ ($$$$) $$$ $$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$: $$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$$ // $$$$$ $$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$. — 2024. — $$$. 22, $$. 3. — $. $$$–$$$.
$$⠄$$$$$$, $. $., $$$$$$, $. $. $$$-$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$$$$: $$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ // $$$$$$ $$$$$$$ $$$$$$$$. — 2021. — $$$. 22, $$. 6. — $. 352–$$$.
$$⠄$$$$$$, $., $$ $$. $$$$$ $$$-$$$$$ $$$$$$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$$$$ // $$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$$$. — 2025. — $$$. $$, $$. 1. — $. 15–28.
38⠄$$$$, $., $$ $$. $$$$$$$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$ $$$$ // $$$$$$ $$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$$$. — 2023. — $$$. 74. — $. $$$–$$$.
$$⠄$$$$, $., $$$$$$$, $., $$ $$. $$$$$$$$$$$$$ $$$$$-$$$$$$$ $$$$ $$$ $$$$$$ $$$$$$ $$ $$$$$$$$ $$$$ $$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$$ // $$$$$$ $$$$$$. — 2020. — $$$. 6. — $. $$$–$$$.
$$⠄$$, $., $$ $$. $$$$$$$$$ $$$$$$$$$$ $$ $$$ $$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$$$$ // $$$$$$$$$ $$$$$ $$$$$$$$$. — 2021. — $$$. 22, $$. 2. — $. $$$–$$$.
41⠄$$$$, $., $$ $$. $$$$$$$$$ $$$ $$$$$ $$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$ // $$$$$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$$$. — 2022. — $$$. 13. — $. $$$$–$$$$.
$$⠄$$$$$, $., $$ $$. $$$$$ $$$ $$$$$$$$ $$ $$$$$ $$$$$$$$ // $$$$$$ $$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$$. — 2020. — $$$. 58. — $. $$$–$$$.